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Título: Recuperação e purificação parcial de proteases colagenolíticas de tainha (Mugil liza) usando precipitação e particionamento em sistemas de fases
Autor: Costa, Beatriz de Aquino Marques da
Endereco Lattes do autor: http://lattes.cnpq.br/2650705679652460
Orientador: Porto, Ana Lúcia Figueiredo
Endereco Lattes do orientador : http://lattes.cnpq.br/4989617783837981
Palavras-chave: Biotecnologia;Indústria pesqueira;Resíduos orgânicos;Enzimas proteolíticas;Purificação
Data do documento: 3-Fev-2020
Citação: COSTA, Beatriz de Aquino Marques da. Recuperação e purificação parcial de proteases colagenolíticas de tainha (Mugil liza) usando precipitação e particionamento em sistemas de fases. 2020. 39 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Bacharelado em Ciências Biológicas) - Departamento de Biologia, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Recife, 2020.
Abstract: Proteases play an important role in the field of biotechnology studies, which is why the research for alternative sources is highly desirable. Thus, combining extraction, recovery and purification techniques to alternative sources, such as by-products of the fishery production chain, in order to generate the least possible damage to the aquatic environment is profitable for the global enzyme market. Therefore, the objective of the present work is to partially recover and purify collagenolytic proteases from Mullet (Mugil liza) digestive viscera with potential biotechnological application. For this, the digestive viscera extract (intestine, liverand a mixture of various viscera) was precipitated using ammonium sulfate ((NH4) 2SO4). In addition, the intestinal viscera were submitted to partitioning by an Aqueous Two-Phase System (ATPS) and a Three-Phase Partitioning system (TPP), to evaluate the most beneficial conditions for the purification of collagenolytic proteases. The results obtained demonstrate that, for ammonium sulphate precipitation, the best results of Purification Factor occurred in concentrations of 30-60% for all assessed extracts (intestine, liver and mix); the aqueous two-phase system (PEG/Citrate) carried out with Mullet intestinal viscera extract demonstrates that the conditions: PEG of 8000 g/mol molar mass; 20% concentration of PEG; 15% citrate concentration lead to the highest purification factor. It is also observed that the collagenases tend to migrate to the PEG-rich phase; for the three-phase system (t-butanol / (NH4) 2SO4) the highest recovery rate of collagenolytic protease was observed in the proportion of 1:0.5, obtaining recovery of 240.01% and a purification factorof 2,55. Thus, it is concluded that the tests can be used in the recovery of biomolecules from neglected organic solid waste from the fishing industry.
Resumo: As protases desempenham um papel importante no campo dos estudos de biotecnologia, razão pela qual a pesquisa por fontes alternativas é altamente desejável. Assim, aliar técnicas de extração, recuperação e purificação a fontes alternativas, como subprodutos da cadeia produtiva da pesca, a fim de gerar o menor dano possível ao meio aquático é rentável para o mercado global de enzimas. Portanto, o objetivo do presente trabalho é recuperar parcialmente e purificar proteases colagenolíticas de vísceras digestivas de Tainha (Mugil liza) com potencial aplicação biotecnológica. Para isso, o extrato de vísceras digestivas (intestino, fígado e uma mistura de várias vísceras) foi precipitado utilizando sulfato de amônio. Além disso, as vísceras intestinais foram submetidas à partição por um Sistema Aquoso de Duas Fases (SDFA) e um Sistema de Partição Trifásica (TPP), a fim de avaliar as condições mais benéficas para a purificação de proteases colagenolíticas. Os resultados obtidos demonstram que, para precipitação com sulfato de amônio, os melhores resultados do Fator de Purificação ocorreram nas concentrações de 30-60% para todos os extratos avaliados (intestino, fígado e mix); o sistema bifásico aquoso (PEG/Citrato) realizado com extrato de vísceras intestinais de tainha demonstra que as condições: PEG de 8000 g/mol de massa molar; concentração de 20% de PEG; A concentração de 15% de citrato leva ao fator de purificação mais alto. Observa-se também que as colagenases tendem a migrar para a fase rica em PEG; para o sistema trifásico a maior taxa de recuperação da protease colagenolítica foi observada na proporção de 1:0,5, obtendo recuperação de 240,01% e fator de purificação de 2,55. Assim, conclui-se que os ensaios podem ser utilizados na recuperação de biomoléculas de resíduos sólidos orgânicos negligenciados da indústria pesqueira.
URI: https://repository.ufrpe.br/handle/123456789/3157
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